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40种常用细胞培养基配方

摘要 : 制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2~7.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。

31营养琼脂

成分:

蛋白胨 10g

牛肉膏 3g

氯化钠 5g

琼脂 15~20g

蒸馏水 1000mL

制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2~7.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。

注:此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%。

32营养肉汤

成分:

蛋白陈 10g

牛肉膏 3g

氯化钠 5g

蒸馏水 1000mL

pH7.4

制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶225mL,121℃高压灭菌15min。

33 乳糖胆盐发酵

成分:

蛋白胨 20g

猪胆盐(或牛,羊胆盐) 5g

乳糖 10g

0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL

蒸馏水 1000mL

pH7.4

制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。

注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。

34乳糖发酵管

成分:

蛋白胨 20g

乳糖 10g

0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL

蒸馏水 1000mL

pH7。4

制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。

注:①双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。

②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。

35 EC肉汤

成分:

胰蛋白胨 20g

3号胆盐(或混合胆盐) 1.5g

乳糖 5g

磷酸氢二钾 4g

磷酸二氢钾 1.5g

氯化钠 5g

蒸馏水 1000mL

制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121℃高压灭菌15min,最终pH为6.9%26plusmn;0.2。

36 缓冲蛋白胨水(BP)

成分:

蛋白胨 10g

氯化钠 5g

磷酸氢二钠(Na2HPO4%26bull;12H2O) 9g

磷酸二氢钾 1.5g

蒸馏水 1000mL

pH7.2

制法:按上述成分配好后以大烧瓶装,121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。

注:本培养基供沙门氏菌前增菌用。

37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM)

甲液

胰蛋白胨 5g

氯化钠 8g

磷酸二氢钾 1。6g

蒸馏水 1000mL

乙液

氯化镁(化学纯) 40g

蒸馏水 100mL

4。13.3 丙液

0。4%孔雀绿水溶液。

制法:分别按上述成分配好后,121℃高压灭菌15min备用。临用时取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以无菌操作混合即可。

注:本培养基亦称Rappaport 10(R10)增菌液。

38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)

基础培养基

多胨或眎胨 5g

胆盐 1g

碳酸钙 10g

硫代硫酸钠 30g

蒸馏水 1000mL

碘溶液

碘 6g

碘化钾 5g

蒸馏水 20mL

制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100mL。分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL,0.1%煌绿溶液1mL。

39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)

基础液:

蛋白胨 10g

牛肉膏 5g

氯化钠 3g

碳酸钙 45g

蒸馏水 1000mL

将各成分加入于蒸馏水中,加热至约70℃溶解,校正pH至7.0%26plusmn;0.1,121℃高压灭菌20min。

硫代硫酸钠溶液

硫代硫酸钠(Na2S2O3%26bull;5H2O) 50g

蒸馏水 加至100mL

碘溶液

碘片 20g

碘化钾 25g

蒸馏水加至 100mL

将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中,加入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸馏水至规 定量。贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用。

煌绿水溶液

煌绿 0.5g

蒸馏水 100mL

存放暗处,不少于1d,使其自然灭菌。

牛胆盐溶液

干燥的牛胆盐 10g

蒸馏水 100mL

煮沸溶解,121℃高压灭菌20min。

制备:

基础液 900mL

硫代硫酸钠溶液 100mL

碘液 20mL

煌绿溶液 2mL

牛胆盐溶液 50mL

临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入于基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分。分装于灭菌瓶中,每瓶100mL。

40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)

成分:

蛋白胨 5g

乳糖 4g

亚硒酸氢钠 4g

磷酸氢二钠 5.5g

磷酸二氢钾 4.58

L-胱氨酸 0.01g

蒸馏水 1000mL

1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氢氧化钠1.5mL,使溶解,再加入蒸馏水8.5mL即成。

制法:将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,俟冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合。再加入1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL。分装于灭菌瓶中,每瓶100mL,pH应为7.0%26plusmn;0.1。

41 GN增菌液

成分:

胰蛋白胨 20g

葡萄糖 1g

甘露醇 2g

柠檬酸钠 5g

去氧胆酸钠 0.5g

磷酸氢二钾 4g

磷酸二氢钾 1.5g

氯化钠 5g

蒸馏水 1000mL

pH7.0

制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH。分装每瓶225mL,115℃高压灭菌15min。

42 肠道菌增菌肉汤

成分:

蛋白胨1 10g

葡萄糖 5g

牛胆盐 20g

磷酸氢二钠 8g

磷酸二氢钾 2g

煌绿 0.015g

蒸馏水 1000mL

pH7.2

制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH。分装每瓶30mL,115℃高压灭菌15min。

43 亚硫酸铋琼脂(BS)

成分:

蛋白胨 10g

牛肉膏 5g

葡萄糖 5g

硫酸亚铁 0.3g

磷酸氢二钠 4g

煌绿 0.025g

柠檬酸铋铵 2g

亚硫酸钠 6g

琼脂 18~20g

蒸馏水 1000mL

pH7.5

制法:

1 将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。

2 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。

3 将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃

4 将以上三液合并,补充蒸馏水至1000mL,校正pH,加0.5%煌绿水溶液5mL,摇匀。冷至50~55℃,倾注平皿。

注:此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热。以免降低其选择性。应在临用前一天制备,贮存于室温暗处。超过48h不宜使用。

44 DHL琼脂

成分:

蛋白胨 20g

牛肉膏 3g

乳糖 10g

蔗糖 10g

去氧胆酸钠 1g

硫代硫酸钠 2.3g

柠檬酸钠 1g

柠檬酸铁铵 1g

中性红 0.03g

琼脂 18~20g

蒸馏水 1000mL

pH7.3

制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中,校正pH。 再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入0.5%中性红水溶液6mL,待冷至50~55℃,倾注平板。

45 HE琼脂

成分:

脙胨 12g

牛肉膏 3g

乳糖 12g

蔗糖 12g

水杨素 2g

胆盐 20g

氯化钠 5g

琼脂 18~20g

蒸馏水 1000mL

0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL

Andrade指示剂 20mL

甲液 20mL

乙液 20mL

pH7.5

制法:将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600mL蒸馏水内,加热溶解。加入 甲液和乙液于基础液内,校正pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50~55℃,倾注平板。

注:①此培养基不可高压灭菌。

②甲液的配制

硫代硫酸钠 34g

柠檬酸铁铵 4g

蒸馏水 100mL

②乙液的配制

去氧胆酸钠 10g

蒸馏水 100mL

②Andrade指示剂

酸性复红 0.5g

1mol/L氢氧化钠溶液 16mL

蒸馏水 100mL

将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2mL。

46 SS琼脂

基础培养基:

牛肉膏 5g

眎胨 5g

三号胆盐 3.5g

琼脂 17g

蒸馏水 1000mL

再将两液混合,121℃高压灭菌15min,保存备用。

完全培养基:

基础培养基 100mL

乳糖 10g

柠檬酸钠 8.5g

硫代硫酸钠 8.5g

10%柠檬酸铁溶液 10mL

1%中性红溶液 2.5mL

0.1%煌绿溶液 0.33mL

加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。

注:①制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48h内使用。

②煌绿溶液配好后应在10d以内使用。

③可以购用SS琼脂的干燥培养基。

47 WS琼脂

成分:

②胨 12g

牛肉膏 3g

氯化钠 5g

乳糖 12g

蔗糖 12g

十二烷基硫酸钠 2g

琼脂 15g

Andrade指示剂 20mL

0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL

甲液 20mL

蒸馏水 1000mL

pH7.0

制法:除指示剂和甲液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正pH后加入指示剂和甲液,倾注平板应呈草绿色。

注:①供沙门氏菌分离用。

②Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂。

48 麦康凯琼脂

成分:

蛋白胨 17g

眎胨 3g

猪胆盐(或牛,羊胆盐) 5g

氯化钠 5g

琼脂 17g

蒸馏水 1000mL

乳糖 10g

0.01%结晶紫水溶液 10mL

0.5%中性红水溶液 5mL

制法:

1 将蛋白胨,眎,胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中,校正pH7.2。将琼脂加入600mL

加热溶解。将两液合并,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。

2 临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至50~55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。

注:结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。

49 伊红美蓝琼脂(EMB)

成分:

蛋白胨 10g

乳糖 10g

磷酸氢二钾 2g

琼脂 17g

2%伊红Y溶液 20mL

0.65%美蓝溶液 10mL

蒸馏水 1000mL

pH7.1

制法:将蛋白胨,磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。

50三糖铁琼脂(TSI)

成分:

蛋白胨 20g

牛肉膏 5g

乳糖 10g

蔗糖 10g

葡萄糖 1g

氯化钠 5g

硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2?6H2O〕 0.2g

硫代硫酸钠 0.2g

琼脂 12g

酚红 0.025g

蒸馏水 1000mL

pH7.4

制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。

51 三糖铁琼脂(换用方法)

成分:

蛋白胨 15g

眎胨 5g

牛肉膏 3g

酵母膏 3g

乳糖 10g

蔗糖 10g

葡萄糖 1g

氯化钠 5g

硫酸亚铁 0.2g

硫代硫酸钠 0.3g

琼脂 12g

酚红 0.025g

蒸馏水 1000mL

pH7.4

制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0。2%酚红水溶液12。5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min,放置高层斜面备用。

52 克氏双糖铁琼脂(KI)

上层培养基成分

血消化汤(pH7.6) 500mL

琼脂 6.5g

硫代硫酸钠 0.1g

硫酸亚铁铵 0.1g

乳糖 5g

0.2%酚红溶液 5mL

下层培养基成分

血消化汤(pH7.6) 500mL

琼脂 2g

葡萄糖 1g

0.2%酚红溶液 5mL

制法:

1 取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解。

2 分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌12mm%26times;100mm试管内,每管约2mL。115℃高压灭菌10min。

3 将上层培养基放在56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固。

4 当下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5mL,放成斜面。

53 克氏双糖铁琼脂(换用方法)

成分:

蛋白胨 20g

牛肉膏 3g

酵母膏 3g

乳糖 10g

葡萄糖 1g

氯化钠 5g

柠檬酸铁铵 0.5g

硫代硫酸钠 0.5g

琼脂 12g

酚红 0.025g

蒸馏水 1000mL

pH7.4

制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0。2%酚红水溶液12。5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。

54 葡萄糖半固体发酵管

成分:

蛋白胨 1g

牛肉膏 0.3g

氯化钠 0.5g

1。6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL

葡萄糖 1g

琼脂 0.3g

蒸馏水 100mL

pH7.4

制法:将蛋白胨,牛肉膏和氯化钠加入于水中,校正pH后加入琼脂加热溶解,再加入指示剂和葡萄糖,分装小试管,灭菌121℃ 15 min。

55 5%乳糖发酵管

成分:

蛋白胨 0.2g

氯化钠 0.5g

乳糖 5g

2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL

蒸馏水 100mL

pH7.4

制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸馏水内,校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,分别灭菌121℃ 15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内。

注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵。

56 CAYE培养基

此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内,如无此培养基,亦可用Honda氏产毒肉汤。

57 Honda氏产毒肉汤

成分:

水解酪蛋白 20g

酵母浸膏粉 10g

氯化钠 2.5g

磷酸氢二钠 15g

葡萄糖 5g

微量元素 0.5mL

蒸馏水 1000mL

pH7.5

制法:溶解后校正pH,高压灭菌121℃ 15min,待冷至45~50℃时,加入林可霉素溶液,每毫升培养基内含90%26mu;g。

微量元素配方:硫酸镁 5g,氯化铁 0.5g,氯化钻 2g,蒸馏水 100mL

58 Elek氏培养基(毒素测定用)

成分:

胨 20g

麦芽糖 3g

乳糖 0.7g

氯化钠 5g

琼脂 15g

40%氢氧化钠溶液 1.5mL

蒸馏水 1000mL

pH7.8

制法:用500mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸,并用滤纸过滤。用1mo1/L氢氧化钠校正pH。用另外500mL蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合,分装试管10mL或20mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂倾注平板。

59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基

成分:

甲液:胰蛋白胨 10g

蒸馏水 1000mL

乙液:磷酸氢二钠 9.5g

蒸馏水 1000mL

丙液:氯化镁(MgCl2%26bull;6H2O) 40g

蒸馏水 400mL

以上分别在121℃灭菌15min。

丁液:孔雀绿 0.2g

蒸馏水 100mL

戊液:羧苄青霉素 1mg/mL

制法:取甲液620mL,乙液160mL,丙液212mL混合,再加入丁液6.4mL和戊液2.4mL,即为1000mL培养基。分装灭菌烧瓶,每瓶100mL,或灭菌试管10mL。

60 胰蛋白胨水

成分:

胰蛋白胨 10g

蒸馏水 1000mL

pH7.0

制法:将上述成分溶解,校正pH。分装试管,121℃高压灭菌15min。

61 Rustigian氏尿素培养液

成分:

尿素 20.0g

酵母浸膏 0.1g

磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.091g

磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0.095g

酚红 0.01g

蒸馏水 1000mL

制法:将上述成分:于蒸馏水中溶解,校正pH为6.8%26plusmn;0.2。 不要加热,过滤除菌,无菌分装于灭菌小试管 中,每管为约3mL。

用途:尿素酶试验用。

62 氯化钠结晶紫增菌液

成分:

蛋白胨 20g

氯化钠 40g

0.01%结晶紫溶液 5mL

蒸馏水 1000mL

pH9.0

制法:

除结晶紫外,其他按上述成分:配好,加热溶解。约加30%氢氧化钾溶液4。5mL,校正pH。加热煮沸,过滤。再加入结晶紫溶液,混合后分装试管。121℃高压灭菌15min。

63 氯化钠蔗糖琼脂

成分:

蛋白胨 10g

牛肉膏 10g

氯化钠 50g

蔗糖 10g

琼脂 18g

0.2%溴麝香草酚蓝溶液 20mL

蒸馏水 1000mL

pH7.8

制法:将牛肉膏,蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热溶解,过滤。加入指示剂,分装烧瓶100mL。121℃高压灭菌15min备用。临用前在100mL培养基内加入蔗糖1g,加热溶化并冷至50℃,倾注平板。

64 嗜盐菌选择性琼脂

成分:

蛋白胨 20g

氯化钠 40g

琼脂 17g

0.01%结晶紫溶液 5mL

蒸馏水 1000mL

pH8.7

制法:除结晶紫和琼脂外,其他按上述成分配好,校正pH。加入琼脂,加热溶解。再加入结晶紫溶液,分装烧瓶,每瓶100mL。

65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂

成分:

三糖铁琼脂 1000mL

氯化钠 30g

制法:按前面三糖铁琼脂,再加入氯化钠30g,分装试管,121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。

66 氯化钠血琼脂

成分:

酵母膏 3g

蛋白胨 10g

氯化钠 70g

磷酸氢二钠 5g

甘露醇 10g

结晶紫 0.001g

琼脂 15g

蒸馏水 1000mL

制法:调pH8.0加热30min(不必高压),待冷至45℃左右时,加入新鲜人或兔血(5%~10%)混合均匀,倾注平皿。

67 3.5%氯化钠生化试验培养基

成分及制法:根据所需糖的种类按3.2配制。只是将氯化钠含量改为3.5%,pH为7.7。

68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)

成分:

磷酸氢二钠(Na2HPO4 8.23g

磷酸二氢钠(NaH2PO4?H2O) 1.2g

氯化钠(NaCl) 5.0g

三号胆盐 1.5g

山梨醇 20g

制法:将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中,再加入三号胆盐及山梨醇,溶解后校正pH为7.6,分装试管,于121℃高压灭菌15min,备用。

69 CIN-1培养基

基础培养基

胰胨 20.0g

酵母浸膏 2.0g

甘露醇 20.0g

氯化钠 1.0g

去氧胆酸钠 2.0g

硫酸镁(MgSO4?7H2O) 0.01g

琼脂 12.0g

蒸馏水 950mL

pH7.5±0.1

将基础培养基高压灭菌。

Irgasan

以95%的乙醇作溶剂,溶解二苯醚,配成0。4%的溶液,待基础液冷至80℃时,加入1mL混匀。

冷至50℃时,加入:

中性红(3mg/mL) 10.0mL

结晶紫(0.1mg/mL) 10.0mL

头孢菌素(1.5mg/mL) 10.0mL

新生霉素(0.25mg/mL) 10.0mL

最后不断搅拌着加入10.0mL的10%氯化锶,倒平皿。

70 嗜盐性试验培养基

成分:

蛋白胨 2g

氯化钠 按不同量加

蒸馏水 100mL

pH7.7

制法:配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶100mL。每瓶分别加入不同量的氯化钠:(1)不加;(2)3g;(3)7g;(4)9g;(5)11g。待溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min。

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