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70种常用培养基配方之一

摘要 : 试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36%26plusmn;1℃培养1~3h和24h观察结果。如果%26beta;-半乳糖苷酶产生,则于1~3h变黄色,如无此酶则24h不变色。

1、 糖发酵

成分:

牛肉膏 5g

蛋白胨 10g

氯化钠 3g

磷酸氢二钠(Na2HPO4%26bull;12H2O) 2g

0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12ml

蒸馏水 1000ml

pH7.4

制法:

1、葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min。

2、其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100ml,121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将5ml糖溶液加入于100ml培养基内,以无菌操作分装小试管。

注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。

试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃%26plusmn;1℃培养,一般观察2~3d。迟缓反应需观察14~30d。

2、ONPG培养

成分:

邻硝基酚%26beta;-D-半乳糖昔(O-Nitrophenyl-%26beta;-D-galactopyranoside,ONPG) 60mg

0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10ml

1%蛋白胨水(PH7.5) 30ml

制法:将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm%26times;75mm试管,每管0.5ml,用橡皮塞塞紧。

试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36%26plusmn;1℃培养1~3h和24h观察结果。如果%26beta;-半乳糖苷产生,则于1~3h变黄色,如无此酶则24h不变色。

3、西蒙氏柠檬酸盐培养基

成分:

氯化钠 5g

硫酸镁(MgSO4%26bull;7H2O) 0.2g

磷酸二氢铵 1g

磷酸氢二钾 1g

柠檬酸钠 5g

琼脂 20g

蒸馏水 1000ml

0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40ml

pH6.8

制法:先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化。然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min。放成斜面。

试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于36%26plusmn;1℃培养4d,每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色。

4、缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)

成分:

磷酸氢二钾 5g

多胨 7g

葡萄糖 5g

蒸馏水 1000ml

pH7.0

制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1ml,121℃高压灭菌15min。

甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36%26plusmn;1℃培养2~5d,哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养。滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果。鲜红色为阳性,黄色为阴性。甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30ml95%乙醇中,然后加入20ml蒸馏水。

V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于36%26plusmn;1℃培养2~4d。哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养,加入6%%26alpha;-萘酚-乙醇溶液0.5ml和40%氢氧化钾溶液0.2ml,充分振摇试管,观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36%26plusmn;1℃下培养4h再进行观察。

5、克氏柠檬酸盐培养基

成分:

柠檬酸钠 3g

葡萄糖 0.2g

酵母浸膏 0.5g

单盐酸半胱氨酸 0.1g

磷酸二氢钾 1g

氯化钠 5g

0.2%酚红溶液 6ml

琼脂 15g

蒸馏水 1000ml

制法:加热溶解,分装试管,121℃高压灭菌15min。放成斜面。

试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在36%26plusmn;1℃培养7d,每天观察结果。阳性者培养基变为红色。

6、丙二酸钠培养基

成分:

酵母浸膏 1g

硫酸铵 2g

磷酸氢二钾 0.6g

磷酸二氢钾 0.4g

氯化钠 2g

丙二酸钠 3g

0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12ml

蒸馏水 1000ml

pH6.8

制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121℃高压灭菌15min。

试验方法:用新鲜的琼脂培养物接种,于36%26plusmn;1℃培养48h,观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。

7、葡葡糖铵培养基

成分:

氯化钠 5g

硫酸镁(MgSO4%26bull;7H2O) 0.2g

磷酸二氢铵 1g

磷酸氢二钾 1g

葡萄糖 2g

琼脂 20g

蒸馏水 1000ml

0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40ml

pH6.8

制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min,放成斜面。

试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20~100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36%26plusmn;1℃培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。

注:容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用。如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果。

7、葡葡糖铵培养基

成分:

氯化钠 5g

硫酸镁(MgSO4%26bull;7H2O) 0.2g

磷酸二氢铵 1g

磷酸氢二钾 1g

葡萄糖 2g

琼脂 20g

蒸馏水 1000ml

0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40ml

pH6.8

制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min,放成斜面。

试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20~100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36%26plusmn;1℃培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。

注:容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用。如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果。

8、Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)

成分:

蛋白胨 2g

氯化钠 5g

磷酸氢二钾 0.3g

琼脂 4g

葡萄糖 10g

0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12ml

蒸馏水 1000ml

pH7.2

制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2。加入葡萄糖、琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂。混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用。

试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36%26plusmn;1℃培养。

9、马尿酸钠培养基

成分:

马尿酸钠 1g

肉浸液 100ml

制法:将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线。以标志管内液面高度,高压灭菌121℃20min。

试剂:三氯化铁(FeCl3%26bull;6H2O)12g,溶于2%盐酸溶液100ml中即成。

试验方法:用纯培养物接种,于42℃培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量。经离心沉淀,吸取上清液0.8ml,加入三氯化铁试剂0.2ml,立即混合均匀,经10~15min,观察结果。

结果:出现恒久之沉淀物为阳性。

10、营养明胶

成分:

蛋白胨 5g

牛肉膏 3g

明胶 120g

蒸馏水 1000ml

pH6.8~7.0

制法:加热溶解,校正至pH7.4~7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固。复查最终pH应为6.8~7.0。

试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在22~25℃培养,每天观察结果,记录液化时间。或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果。

11、苯丙氨酸培养基

成分:

酵母浸膏 3g

DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g) 2g

磷酸氢二钠 1g

氯化钠 5g

琼脂 12g

蒸馏水 1000ml

制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面。

试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36%26plusmn;1℃培养4h或18~24h.滴加10%三氯化铁溶液2~3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。

12、氨基酸脱羧酶试验培养基

成分:

蛋白胨 5g

酵母浸膏 3g

葡萄糖 1g

蒸馏水 1000ml

1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1ml

L-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100ml

pH6.8

制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100ml,分别加入各种氨基酸:赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸、L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入,再行校正pH至6.8,对照培养基不加氨基酸,分装于灭菌的小试管内,每管0.5ml,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min。

试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36%26plusmn;1℃培养18~24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色,对照管应为黄色.。

13、蛋白胨水(靛基质试验用)

成分:

蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g

氯化钠 5g

蒸馏水 1000ml

pH7.4

制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min。

靛基质试剂

柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25ml。

欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95ml95%乙醇内,然后缓慢加入浓盐酸20ml。

试验方法:挑取小量培养物接种,在36%26plusmn;1℃培养1~2d,必要时可培养4~5d,加入柯凡克试剂约0.5ml,轻摇试管,阳性者于试剂层成深红色;或加入欧-波试剂约0.5ml,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。

注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。

14、硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)

成分:

牛肉膏 3g

酵母浸膏 3g

蛋白胨 10g

硫酸亚铁 0.2g

硫代硫酸钠 0.3g

氯化钠 5g

琼脂 12g

蒸馏水 1000ml

pH7.4

制法:加热溶解,校正pH,分装试管,115℃高压灭菌15min,取出直立候其凝固。

试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36%26plusmn;1℃培养1~2d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色。

注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基。

15、尿素琼脂

成分:

蛋白胨 1g

氯化钠 5g

葡萄糖 1g

磷酸二氢钾 2g

0.4%酚红溶液 3ml

琼脂 20g

蒸馏水 1000ml

20%尿素溶液 100ml

pH7.2%26plusmn;0.1

制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶,121℃高压灭菌15min,冷至50~55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液,尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2%26plusmn;0.1,分装于灭菌试管内,放成斜面备用。

试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36%26plusmn;1℃培养24h,观察结果,尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。

16、氰化钾(KCN)培养基

成分:

蛋白胨 10g

氯化钠 5g

磷酸二氢钾 0.225g

磷酸氢二钠 5.64g

蒸馏水 1000ml

0.5%氰化钾溶液 20ml

pH7.6

制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min,放在冰箱内使其充分冷却,每100ml培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0ml(最后浓度为1:10000),分装于12mm%26times;100mm灭菌试管,每管约4ml,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月,同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。

17、氧化酶试验

试剂:

1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存.

1%%26alpha;-萘酚-乙醇溶液。

试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落,加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加%26alpha;-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色,阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同。

18、 硝酸盐培养基

成分:

硝酸钾 0.2g

蛋白 5g

蒸馏水 1000ml

pH7.4

制法:溶解,校正pH,分装试管,每管约5ml,121℃高压灭菌15min。

硝酸盐还原试剂:

甲液:将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。

乙液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。

试验方法:接种后在36%26plusmn;1℃培养1~4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果:硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。

注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。

19、 细胞色素氧化酶试验

试剂:

1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.

1%%26alpha;-萘酚-乙醇溶液。

试验方法:取37℃(或低于37℃)培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各2~3滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物,如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上。

结果:于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。

20、过氧化氢酶试验

试剂:

3%过氧化氢溶液:临用时配制。

试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3%过氧化氢溶液2ml,观察结果。

结果:于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性。

21 过氧化物酶试验

试剂:2%儿茶酚溶液。

3%过氧化氢溶液。

试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。静置于室温(20℃)中30~60min,观察结果。

结果:阳性反应,细菌变为黑褐色;阴性反应,细菌不变色。

注:过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。

22 磷酸盐缓冲液

储存液

磷酸二氢钾 34g

1mol/L氢氧化钠溶液 175mL

蒸馏水 825mL

pH7.2

制法:先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后,再用蒸馏水稀释至1000mL。

稀释液:取储存液1。25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装每瓶100mL或每管10mL,121℃高压灭菌15min。

23明胶磷酸盐缓冲液

成分:

明胶 2g

磷酸氢二钠 4g

蒸馏水 1000mL

pH6。2

制法:加热溶解,校正pH,121℃高压灭菌15min。

24 乳酸-苯酚溶液

成分:

苯酚 10g

乳酸(比重1.21) 10g

甘油 20g

蒸馏水 10mL

制法:将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油。

用途:检验真菌形态时用。

25 肉浸液肉汤

成分:

绞碎牛肉 500g

氯化钠 5g

蛋白胨 10g

磷酸氢二钾 2g

蒸馏水 1000mL

制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4~7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌30min。

26肉浸液琼脂

成分:

肉浸液肉汤(PH7.4) 1000mL

琼脂 17~20g

制法:加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,121℃高压灭菌30min。根据需要,倾注平板或放成斜面。

27牛肉(或牛心)消化汤

成分:

绞碎牛肉(或牛心) 1000g

15%氢氧化钠溶液 27mL

胰蛋白酶 40mL

三氯甲烷 1mL

氯化钠 10g

蒸馏水 2000mL

制法:

1 称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15min。

2 加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷至40℃。

3 加胰蛋白酶,氯仿,在36±1℃放置4~5h,每小时摇动一二次。

4 4h后,吸取上层液5mL于试管中,加5%硫酸铜溶液0.1mL,4%氢氧化钠溶液5mL,混合之。若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出。

5 加入15%乙酸溶液45mL,对pH试纸呈酸性。

6 煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜。

7 次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸。

8 校正pH7.4~7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL),加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min。

注:①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨。

②胰蛋白酶之配制:称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500mL,蒸馏水1500mL,混合之,装人玻塞瓶内。每日摇匀三次。3d后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05%,放冰箱内保存备用。

28血消化汤

成分:

绞碎猪胃 100g

绞碎猪血块 100g

蒸馏水 1000mL

浓盐酸 10mL

制法:

1 洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎。

2 用绞肉机将猪血块绞碎。

3 将蒸馏水加热至55℃,加入猪胃,猪血块和盐酸,置55℃水浴中24h,时常加以摇动。

4 从水浴内取出,加入1moL/L碳酸钠溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱内一夜。

5 吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75℃,加入1mol/L碳酸钠溶液45mL,煮沸,校正pH7.2~7.4。

6 用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min。

29豆粉琼脂

成分:

牛心消化汤(PH7.4~7.6) 1000mL

琼脂 20g

黄豆粉浸液 50mL

制法:将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤。加入豌豆粉浸液,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min。

豌豆粉浸液制法:取豌豆粉5g,氯化钠10g,加入蒸馏水100mL。置100℃水浴内加热1h,放于冰箱中过夜。吸取上清液即为豌豆浸液。

30血琼脂

成分:

pH7.4~7.6豆粉琼脂 100mL

脱纤维羊血(或兔血) 5~10mL

制法:加热溶化琼脂,冷至50℃,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板。亦可分装灭菌试管,置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。

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