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培养基配制常见问题与解答

摘要 : 配制培养基时碳酸氢钠和hepes添加量之间有没有什么必然的联系?

配制培养基时碳酸氢钠和hepes添加量之间有没有什么必然的联系?我已经的做法对培养基的质量有没有影响,影响有多大?我可否按DMEM的说明书添加3.7g/L的碳酸氢钠,此外再自己再另行添加20mM的hepes。

我参考其他文献上的做法时,就有疑问,但后来还是%26ldquo;根据文献介绍(但文献中用的是Hyclone的DMEM)只添加了1.97g/L的碳酸氢钠,同时添加20m Mhepes,配制好后用10MNaOH调PH到7.2~7.4(过滤后测PH不超过7.5)%26rdquo; 。而且我在配制培养基是,也试用过1MNaOH调PH,但用量很大,所以就以文献介绍的10MNaOH调PH,而按DMEM的说明书碳酸氢钠的添加量应该是3.7g/L。

2.另外我配制培养基时血清加入的方式也是不恰当的。 %26ldquo;我在配制培养基时没有考虑到血清与培养基是等渗的问题,5%的血清体积是算在需要溶解Dmem干粉所需液体之内的(如取水950mL溶解1包干粉,再加50mL血清)%26rdquo;。

我已经这样配制的培养基如果对细胞培养影响很大,现存的500mL培养基是否还可补救,应该如何补救。

3.谷氨酰氨添加过量对细胞有没有毒性。%26ldquo;我们实验室的干粉培养基一次不是配制一个最小包装(1L),而是以200mL、400mL等这样的量来配制,剩余的干粉封口后仍于4度保存,但有时可能封口不严,再次用时干粉有些潮解结块,这对其中的营养成分可能会有影响,尤其是谷氨酰氨可能降解,用这样已经结块的干粉配置培养基时,想重新再添加谷氨酰氨,又担心会过量,请各位给出出主意%26rdquo;。

1. 配制培养基时碳酸氢钠和hepes添加量之间没有必然的联系。碳酸氢钠是必须加的,与培养箱内的二氧化碳(溶解在液体内就是碳酸)形成碳酸缓冲对。而HEPES是两性有机缓冲剂(既可以缓冲酸也可以缓冲碱),其缓冲能力大大高于碳酸缓冲液。

因此,碳酸氢钠应该按照说明书的剂量加,HEPES作为辅助缓冲,其用量为10-25mmol/L。

2. 培养液的量是否要考虑添加血清的量?各种观点都有,但不是渗透压的因素。可以提高营养成分的浓度(曾有2X、4X氨基酸培养的),但效果也不是很明显。考虑到现在大多用配好的液体培养液,其配制时并不考虑血清的量,所以还是应该按照1L的量来配。

3. 干粉的最小包装必须一次溶解,因为干粉的混合不是均匀的。谷氨酰氨的水溶液不稳定,新配制的不用添加。

另外,培养液溶解后不需调节pH,配方是根据pH7.4组成的,如果溶解后偏碱可以冲入CO2。

问题:

我的培养方案是查阅许多资料而定的,因为血清量过大也会容易造成异源细胞的过渡生长。现在用无血清培养基培养成功的细胞很多。

答:现在用无血清培养基培养细胞的都是专用培养基,根据所培养的细胞,采用适宜的培养基并添加相应的细胞因子,与普通培养基不加血清的培养是完全不同的。

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