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培养基母液的配置注意事项

摘要 : 培养基配制通常先根据各组分性质,配制成较浓的母液(母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍),贮存在冰箱中备用,以后配制培养基时根据用量量取。

培养基配制通常先根据各组分性质,配制成较浓的母液(母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍),贮存在冰箱中备用,以后配制培养基时根据用量量取。由于培养基成分较多,如果每配制一次即进行多次称量(不少成分用量较微),不仅会造成较大的误差,而且会增加工作量,因而配制母液可使培养基配制方便准确。配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍,倍数不宜过高。MS培养基母液及培养基配方法参考表2。

大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存,以免长期贮存发生沉淀。若将全部大量成分配在一起时,为防止在混合时发生沉淀,须在各药品充分溶解后,按表1.2中化合物出现顺序混合,氯化钙最后加入,以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后,在1000 ml容量瓶中定 容,然后移入磨口瓶中,贴上标签,置于普通冰箱(4℃)贮存。

微量元素母液配制时,由于培养基中微量元素用量甚微,浓度为0.l~0.0001mg/l,所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。一般将微量元素分别称量溶解,定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中,但也有将KI分别配制,单独贮存在棕色瓶中。配好后,贴上标签,贮存于4℃冰箱。

培养基中的铁盐母液一般单独配制。目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。称取Na2-EDTA 3.73 g,FeSO4 ·2H2O 2.78 g,分别溶解(可加热),然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。转入细口瓶,贴上标签,4℃冰箱中保存。

氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时,母液浓度通常为原培养基配方的50倍(或100)。常用氨基酸和维生素为水溶性物质,可用蒸馏水溶解,但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解,然后用重蒸馏水定容。配制好后,转入细口瓶,贴上标签,-20℃(或4℃)冰箱中保存。

植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要,灵活设计其浓度,一般为 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。如配0.5 mg/l NAA母液,称25 mg NAA溶于50 ml重蒸馏水,或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸馏水中。IAA要用棕色瓶暗中贮存,以免光照分解。常用植物生长调节物质和维生素特征见表3。生长素为醇溶性物质,配制时,应用少量95%酒精或稀碱溶解,然后用重蒸馏水溶解定容;细胞分裂素应先用少量1 N NaOH或HCl溶解,然后用重蒸馏水定容。配制好的母液放置在4℃普通冰箱中备用。这些母液保存时间不宜过长,当出现沉淀、浑浊及霉菌团时,应重新配制。

椰乳中因含有许多种细胞分裂素物质,如KT类似物(9-β-D-ribofuranosylzeatin)、玉米素及玉米素核糖甙等,有时可与细胞分裂素相互代替。采集到椰子时,应检查其汁液(保证没有变质),煮沸,滤纸过滤掉蛋白,高温高压消毒,贮存在-20℃下备用。有时可直接加入培养基。酵母提取液也一般也现用现配,称量酵母粉后,加热至沸腾30分钟,过滤去渣。

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