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液相色谱常见14个问题及其解决方法

摘要 : 用HPLC进行分析时,保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?

一、问:用hplc进行分析时,保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?

关于漂移问题:

1. 温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定。

2. 流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。

3. 柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡。

关于快速变化问题:

1. 流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定。

2. 泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。

3. 流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。

二、问:色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题?

1. 柱效要高

2. 热稳定性好

3. 化学惰性强

具体选择应注意:

1. 柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析。

2. 柱子内径。内径大小决定柱容量。

3. 液膜厚度。分析样品温度不一样,对膜厚有不同要求,温度高液膜要厚,温度低液膜要薄。

4. 柱长度。柱越长,柱效越高,分离效果越好,但也存在吸附问题,柱子过长,分析时间长,因此要根据样品考虑柱子长度。

5. 外涂层(柱体)的选择。

6. 另外还有仪器型号、分析对象等因素。

三、问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

1. 筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。

2. 存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子。

四、问:从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏?

1. 分配容量(或容量因子)K,好的柱子在高温运行后,分配容量K不应有明显的下降,否则,说明柱子的热稳定性不好。

2. 理论塔板数n,热稳定性好的柱子经受高温后,理论塔板数应基本保持恒定。

3. 柱子的极性。热稳定性好的柱子,高温前后极性变化不大,具体表现为保留指数I值没有大的变化。

4. 噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后,噪声不能增加。

5. 柱子的去活层,毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。质量好的毛细管柱子高温后,去活层不应该变化,表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。

五、问:为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响?

进样器内的玻璃衬套主要有下列作用:

1. 提供一个温度均匀的汽化室,防止局部过热。

2. 玻璃的惰性较不锈钢好,减少了在汽化期间样品分解的可能性。

3. 易于拆换清洗,以保持清洁的汽化室表面,一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室,高温下会慢慢分解,使基流增加,噪声增大,通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。

4. 可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套,以改变汽化室的体积,而不用更换整个进样加热块。

从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。

六、问:毛细管色谱分流进样时,非线性分流的主要原因是什么?

1. 进样器温度太低,样品汽化不完全,发生分级分流。

2. 进样器温度太高,某些组分可能发生热分解,也有的样品可能发生催化分解,或样品部分地被吸附在进样器内表面上。

3. 在分流点以前样品没有混合均匀或混合不充分。

4. 系统的进样垫、柱接头等地方漏气。

七、问:HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法。

1. 样品量不足,解决办法为增加样品量。

2. 样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子。

3. 样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器。

4. 检测器衰减太多。调整衰减即可。

5. 检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数。

6. 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。

7. 检测池中有气泡。解决办法为排气。

8. 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。

9. 流动相流量不合适。调整流速即可。

10. 检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。

八、问:做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在?如何解决?

原因可能有:

1. 泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理。

2. 比例阀失效,更换比例阀即可。

3. 泵密封垫损坏,更换密封垫即可。

4. 溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法。

5. 系统检漏,找出漏点,密封即可。

6. 梯度洗脱,这时压力波动是正常的。

九、问:做PGS/MS分析时,如何防止焦油状污染物进入毛细柱?

聚合物,尤其是一些含氮,硫及卤素的高分子裂解时,常有焦油状物质产生。为防止这种焦油状物质进入毛细柱造成污染而使柱性能下降,可采用保护预柱,即在裂解器与毛细柱之间接一填充预柱,通过控制预柱温度而使焦油状物质滞留在预柱内,预柱可置于GC气化室内,这样既容易控制温度,又减少系统的死体积,当然,预柱填料需经常更换。

十、问:我最近更换了另一种牌号的ODS柱,虽然分离情况仍可以,但保留时间不能重现,为什么?

这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来,填料的制造技术有了极大的提高,但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此,同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物,如三乙基胺(TEA),将会使硅醇基的成键能力饱和,从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。

十一、问:我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高,请问为什么?

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因:

1. 拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查;

2. 把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查;

3. 将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。这时,如果柱压仍不下降,再检查;

4. 更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高,请与厂商联系。

一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题,SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。

十二、问:高温毛细柱的使用寿命一般为多长?

毛细柱寿命除决定于柱子本身的性能外,在很大程度上取决于使用情况,如使用温度、样品状态,进样量等,如果在其使用温度范围内,样品干净,色谱柱不被污染的情况下,柱子寿命一般在2~3年之间。

十三、问:如毛细管柱被污染,柱效和分辨率降低,有何方法使它恢复?是否可通过老化来解决?

根据柱污染程度可采取不同的方法来解决,如果污染不严重,污染物沸点不是太高,可通过老化来解决,但老化温度不可超过柱子的最高使用温度,且一般要较长时间(8~30)小时;如果污染较严重,或通过老化仍不能使柱性能恢复,那就必须采用溶剂清洗,通常是用5倍柱容积的溶剂(如正戊烷,二氯甲烷等)通过色谱柱。当然,清洗熔剂用的越多,对柱性能的损坏越大,清洗完后,在通载气老化一定时间,如果柱性能恢复,便可继续使用。

必须指出:只有交联柱才能清洗,对于非交联柱,清洗柱子会彻底失效,因为固定液被洗掉了,至于清洗用溶剂的选择,可参考说明书。

十四、问:BPX70毛细柱是否可用于GC/MS分析?

完全可以。BPX70为极性柱,使用温度范围宽(25~260℃),程序升温可达290℃,流失低,适合于分析脂肪酸甲酯的的各种位置和几何异构体,药物异构体,碳水化合物等。因BPX70为交联柱,故用于GC/MS很稳定,污染后可清洗再生。

作者:青岚 点击:

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